描述：

Hoechst 33258，也称 bisBenzimide H 33258 或 HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光 染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流 式细胞仪检测。Hoechst 33258 也常用于普通的细胞核染色，或常规的 DNA 染色。Hoechst 33258 的 最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链 DNA 结合后，最大激发波 长为 352nm，最大发射波长为 461nm。本 Hoechst 33258 染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞 核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

储存：

-20℃保存

有效期：

一年

浓度：

0.01mg/ml

操作步骤：

1. 固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则 先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。如果不需要进行其它染 色，则直接进行后续的 Hoechst 33258 染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮细 胞，至少加入待染色样品 3 倍体积的工作液，混匀。室温放置 3-5 分钟。

c. 吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的 细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 活细胞或组织：

a. 加入适当量 Hoechst 33258 工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔 需加入 1mL 工作液，对于 96 孔板一个孔需加入 100μL 工作液。

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养 20-30 分钟。弃染色液，用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可 进行荧光检测。

注意事项：

荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量 当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。