常温运输，4ºC 1年稳定，－20ºC长期保存。

描述：CHO细胞(Chinese hamster ovary cell)，为上皮样细胞，通常贴壁生长、也可悬浮生长，广泛应用于基因表达、抗体研究、药物开发等生物科研领域。本转染试剂适用于多种CHO细胞的亚型。

自备试剂：无菌150mM NaCl即0.9%生理盐水或无菌蒸馏水或PBS缓冲液，用于离体细胞转染制备转染混合物。5%无菌葡萄糖，用于离体或在体转染转染混合物制备。与复合物颗粒形成有关，勿用其它缓冲液替代。

DNA、siRNA和寡聚核苷酸：建议溶于灭菌蒸馏水。质粒DNA高纯度OD260/280 ~1.8，无内毒素。可用内毒素清除剂(#D1501)清除内毒素。寡聚核苷酸和用于RNA干扰(siRNA)的核苷酸，可单独或与质粒DNA共转染，但必须使用经HPLC或凝胶洗脱纯化去除杂链的高纯度片段。siRNA和寡聚核苷酸与DNA转染及优化操作相似，但对其用量进行细致的优化很重要。

细胞准备（重要!）

接种细胞数：参见附表细胞计数接种。培养时间：转染前应培养~24h，使之处于分裂和旺盛生长期。细胞密度与转染时机：培养~24h后，细胞覆盖培养皿表面积的70~90%时为转染最佳时机。低密度细胞的转染率并不低，但总细胞数少因而蛋白表达总量也不会很高。在较高细胞密度时转染较好，但100%长满的细胞转染效率很低，因此接种细胞要均匀，以减少因局部紧密接触而致生长抑制的难转染细胞，否则最好重头接种细胞。CHO细胞转染试剂允许在细胞铺板时或铺板后立即转染，效果与贴壁后转染相似，但大大节省时间和劳动，适合高通量筛选。甚至一些难转染细胞也可尝试此即时转染方法。血清和培养基：血清和抗生素不影响转染，在10~30%血清培养基转染表达效率更高。转染混合物体积为培养基的1/10，参见表第5栏。如果培养基未明显变黄，转染前可不更换。如转染结果满意，转染后无需更换培养基。但转染混合物稀释了培养基，转染4~8小时后换培养基会可进一步增加转染效率。

CHO细胞转染试剂和DNA用量及优化

任何转染和优化方案需考虑转染试剂量、DNA量、但关键是二者所带的电荷比charge ratio简称R，即转染试剂所带正电荷基团相对于核酸负电荷磷酸基团的当量比率。通常R>3时DNA复合物带正电荷可被转染。在操作上，R值规定了二者的用量比例，适宜的R值因细胞类型和细胞密度而异。对于离体细胞转染，转染试剂用量和R值的计算公式如下：

CHO细胞转染试剂体积µl=0.4×R×DNAµg数

R=2.5×CHO细胞转染试剂体积µl¸DNAµg数

初次转染推荐设定R=6或8(附表灰色栏)在24孔板进行转染优化，确定最佳转染方案。在DNA量固定时，对R值的优化相当于优化试剂用量，建议设定R=5、7、9或者6、8、10三档。确定转染效率最高的R值后，再优化DNA用量。附表建议的DNA量已接近所列细胞数的中上限，但仍可~50%增减；也可根据实际情况在较大范围增减DNA用量(0.5~5µg DNA/1×10⁵细胞)，再按公式计算转染试剂用量。CHO细胞转染试剂在R<15时几乎没有细胞毒性，因而无需为降低毒性而优化。

贴壁细胞转染 (以24孔板为例，参见表一)

1. 参见表一第4、5栏。将1µg DNA稀释于100µl无菌生理盐水或无菌蒸馏水或PBS缓冲液(自备，勿用其它缓冲液但可用5%葡萄糖代替)，可振荡混匀。

2. 取2.4µl CHO细胞转染试剂加至DNA溶液，勿用相反的加样顺序。立即振荡混匀，低速瞬时离心将液体甩至管底。

3. 室温放置15分钟。

4. 将100µl转染混合物直接加至1ml含血清培养基中(参见表一最右栏)，倾斜转动培养板混匀。转染前可不更换培养基。

5. 培养24~48小时检测基因表达，或1:10传代后加抗生素筛选。转染后无需更换培养基。但转染混合物稀释了培养基，转染4~8小时后换培养基可进一步增加转染效率。

表一 CHO转染试剂与贴壁细胞加样和优化表

注计算公式：CHO转染试剂体积µl = 0.4 × R × DNA µg数

贴壁细胞在铺板时转染、或铺板后立即转染

1. 细胞准备：用含血清培养基洗涤消化的细胞，去除消化酶。用含血清培养基制备细胞悬液，细胞量稍大些，以转染后24h细胞生长密度达90%，或转染48h内完全长满为宜。

2. 制备转染混合物，参照表一和上述贴壁细胞转染步骤。

3. 铺板后立即转染：将细胞悬液加到培养皿中，然后立即加入CHO转染试剂-DNA转染混合物，混匀。

4. 铺板的同时转染：将CHO转染试剂-DNA转染混合物预先加到培养皿中，然后立即加入细胞悬液。

5. 培养24~48小时检测基因表达。

悬浮细胞转染

以24孔板为例。

1. 按照表二准备细胞和DNA。使用含血清培养基。通常悬浮细胞转染CHO转染试剂和DNA用量比贴壁细胞要大。初始转染推荐R=6，随后可根据转染效率设R=6、7、8、9、10优化。注意转染DNA量参见表二适当再增加约30%并设R=8按公式计算试剂量。

2. 悬浮细胞转染：参见贴壁细胞转染方法制备转染试剂和DNA混合物，室温放置20分钟后直接加至1ml含血清培养基的细胞悬液中。培养24~48小时进行后续实验。

表二 CHO转染试剂转染悬浮细胞加样和优化表