描述：组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒（Cu²⁺法），即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with Copper Ion Method是一种灵敏简单的检测总抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，TAOC）的试剂盒。

原理：Cu²⁺法测定TAOC的原理是利用样品中抗氧化物还原Cu²⁺为Cu⁺，Cu⁺与反应体系中Cu²⁺螯合剂螯合，通过570nm吸光度可以测定Cu⁺产生量，从而测定样品TAOC。利用具有强抗氧化能力的Trolox为标准品，可以计算样品以Trolox为参照的TAOC。

本试剂盒方便快捷，加入待测样品30分钟即可进行吸光度测定。

组成：（1）Cu+螯合剂溶液    25ml/瓶      （2）Cu2+溶液 0.5ml/管

（3）10 mM Trolox标准品溶液   0.5ml /管 （4）组织细胞裂解液 100ml

储存条件：-20℃储存，一年有效。

所需设备：酶标仪 最佳波长570nm

适用范围：测定各类动物培养细胞、组织等。

操作步骤：

1. 样品的准备

1.1 细胞样品的准备：收集新鲜细胞(如果是贴壁细胞，请用细胞刮刮下，不宜使用胰酶和EDTA消化)，PBS洗涤细胞一次，离心收集细胞，吸尽上清。加入200μl预冷的组织细胞裂解液，超声破碎细胞释放其中的抗氧化物。4℃，10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围，可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定，稀释倍数请通过预实验确定。

1.2 组织样品的准备：取20mg组织，加入400μl的预冷的组织细胞裂解液，用匀浆器冰浴匀浆。4℃，10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围，可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定，稀释倍数请通过预实验确定。

2. 试剂盒的准备

总抗氧化能力检测工作液的配制：按下表比例取Cu⁺螯合剂溶液和Cu²⁺溶液配制总抗氧化能力检测工作液。

3. 标准品的准备

利用PBS将10mM的Trolox溶液稀释成1、0.5、0.25、0.125、0.062、0.031mM浓度的Trolox溶液，用于标准曲线测定。每次测定新鲜配制系列标准品稀释液。

4. 测定方法

4.1参考下表，使用96孔板，依次加入总抗氧化能力检测工作液、样品或标准品后，混匀，室温孵育30分钟。

4.2 孵育结束后，利用酶标仪测定A_570nm。如果样品吸光度过高，可适当稀释样品后测定，如果样品吸光度过低，可适当冷冻干燥浓缩样品后测定。

5. 数据处理

利用标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作Trolox抗氧化能力标准曲线，并获得横纵坐标之间的函数关系式，然后利用标曲和各样品的吸光度值计算样品的总抗氧化能力，对于细胞和组织样品，可以根据样品中蛋白浓度测定，计算每毫克蛋白中总抗氧化能力。Trolox抗氧化能力标曲如下图所示：

参考文献:

1. Valko, M. et al., 2006. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell.Bio., 39(1): 44-84.

2. Sies, H., 1997. Oxidative stress: oxidants and antioxidants. Exp. Physiol., 82(2): 291-295.

注意事项:

1. 本试剂盒检测涉及氧化还原反应，很多氧化剂和还原剂都会干扰试剂盒的测定，特别是巯基乙醇、DTT等含有巯基的试剂会严重干扰本试剂盒的测定，请尽量避免。

2.每次测定同时利用标准品制作标准曲线。

3. 初次使用试剂盒时，粉末试剂和小体积液体试剂请适当离心后使用。

4. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。