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ATP含量测定试剂盒 E2031普利莱周三品牌日,周周有惊喜!
  • 品  牌:

    普利莱
  • 货  号:

    E2031
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ATP检测试剂盒(生物发光法)E2031

ATP Assay Kit (Bioluminescence)

产品简介

ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)是一种特异灵敏的检测三磷酸腺苷(ATP)的试剂盒。生物机体内能量物质最终主要代谢为ATP,用于生物活动的能量消耗。通过定量检测ATP可以判断微生物污染、细胞增殖、细胞损伤或细胞活化情况。

本试剂盒采用生物发光法检测ATP浓度,检测原理为萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)催化ATP和Luciferin反应释放光子,在Luciferin和Luciferase过量的反应体系中,发光强度与ATP浓度成正比,通过检测发光强度即可检测ATP的浓度。

本试剂盒经过特殊优化,具有良好的检测线性,比一般的试剂盒测定准确度高,另外通过减缓发光信号衰减带来较高的时间稳定性,发光信号可以在反应启动后5-30min内测定。

本试剂盒检测ATP线性范围为0.001-1μM,灵敏度≤0.001μM。

本试剂盒能够检测细胞裂解上清、组织裂解上清、细胞培养上清、血浆、血清及环保样品中的ATP

试剂盒组成

组份名称

规格

数量

ATP Assay Buffer

13 ml/瓶

1

D-luciferin (100×)

250 μl/管

1

Luciferase (400×)

75 μl/管

1

ATP Standard (100μM)

250 μl/管

1

储存条件

-20 ℃储存,有效期12个月。

注意事项

1. 每次测定时利用标准品制作标准曲线。

2. 实验过程中,除检测缓冲液外,其它试剂请置于冰上。

3. 本产品仅限专业人员用于科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

测定前准备

1. 样品的准备

1.1 细胞裂解上清的准备:将需要测定的细胞(1×106-1×107)收集到2ml的离心管中,4℃、300g离心5分钟,弃去上清,然后加入200μl含0.1%Triton X-100的PBS,冰浴裂解30min,4℃、10000g离心10分钟,收集上清。注:利用不含0.1%Triton X-100的PBS,通过超声裂解亦可。

1.2 组织裂解上清的准备:将需要测定的组织(20-50mg)收集到玻璃匀浆器或自动匀浆管中,然后加入0.5ml含0.1%Triton X-100的PBS,匀浆1min,4℃、10000g离心10分钟,收集上清。注:利用不含0.1%Triton X-100的PBS,通过超声裂解亦可。

1.3 细胞培养上清的准备:将需要测定的细胞接种到培养板中,经过干预因素处理后,直接吸取细胞上清,如果是悬浮细胞,4℃、300g离心5分钟,收集上清。

1.4 血浆样品的准备:取新鲜抗凝血液,4℃、1000g离心10分钟,上清为血浆。

1.5 血清样品的准备:取新鲜血液,室温凝固30min,4℃、1000g离心10分钟,上清为血清。

2. 试剂盒的准备

ATP检测工作液的配制:根据待测样品数参考下表配制适当量的ATP检测工作液,表中试剂按比例混

合后即为ATP检测工作液。

1个样品

10个样品

50个样品

ATP Assay Buffer

97.5 μl

0.975 ml

4.875 ml

D-luciferin (100×)

2 μl

20 μl

100 μl

Luciferase (400×)

0.5 μl

5 μl

25 μl

3. 标准品的准备

在1.5 ml离心管中,加入990μl纯水或裂解液,再取10μl的100μM浓度ATP标准品加入离心管中配制1μM浓度ATP标准品;然后取另外81.5 ml离心管,分别加入500μl纯水或裂解液,再吸取500μl1μM浓度ATP标准品依次倍倍稀释为0.50.250.1250.06250.03120.01560.00780.0039μM浓度。

测定方法

1. 参考下表,使用白色96孔板,先加入标准品或样品,然后加入ATP检测工作液,混匀,室温孵育5分钟。

空白对照孔

标准曲线孔

样品孔

纯水或裂解液

100 μl

标准品

100 μl

样品

100 μl

ATP检测工作液

100 μl

100 μl

100 μl

2. 待反应完成后,利用化学发光酶标仪测定相对发光强度(RLU)。


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