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液体样本总蛋白提取试剂 Liquid Sample Protein Recovery Kit P1255
  • 品  牌:

    普利莱
  • 货  号:

    P1255
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液体样本总蛋白提取试剂盒

描述:

本试剂盒能够在15分钟内对液体样品中的蛋白进行提取浓缩或脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。适用于各种液体样品(10µL1L),如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液;也适于从细胞悬液提取总蛋白。蛋白回收率95-100%,远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法,且可有效去除样品中的脂质,不影响后续SDS-PAGEWestern Blot等生物实验。可用1.5ml离心管微量提取也可大规模制备,简便高效。

组成和保存:

浓缩试剂50ml,适用100x 100ml次浓缩提取。4℃保存 12个月有效

适用样品

1. 液体样品如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液2. 原代或传代细胞悬液,可按液体方式提取总蛋白

蛋白提取程序

微量提取加样量及比例 液体蛋白样品 (ml)     10      100      150

提取试剂 (ml)     50      500      750

H2O (ml)     30      300      450

1. 100ml液体蛋白样品,按比例加5倍体积(500ml) 提取试剂,振荡混匀室温静置3分钟。蛋白浓度较高时,很快发生凝集导致溶液混浊。

2. 10,000g 4℃离心3分钟。蛋白浓度较高时可省略此步骤。

3. 打开管口,加入3倍体积(300 ml)的纯水,振荡混匀。

4. 10,000g 4℃离心3分钟。溶液分为两相。蛋白在两相中间,浓度高时会形成薄膜状或沉淀于管底;浓度低时则肉眼难以看到。

5. 小心吸取上层相,弃去。注意应该保留一定量的上层相,以免吸走中间相的蛋白膜。

6. 加入500 ml 无水乙醇,振荡洗涤沉淀。10,000g 4离心2分钟。弃上清,再次瞬时离心数秒并吸去管内液体。勿触动管底的蛋白沉淀(量少时沉淀不可见)

7. 敞开管口,空气自然干燥。

8. 根据样品蛋白初始浓度,加适量双蒸水或上样缓冲液,955分钟溶解蛋白沉淀。

注意

1. 可室温操作。1 mg/ml总蛋白可被有效沉淀,更低浓度的蛋白可加入白蛋白做载体帮助沉淀有效去除液体样品中的盐(1M)、还原剂(1%巯基乙醇

DTT)、去垢剂(5%SDS1% Triton X-1001% NP-40、油脂等。如果上述成分浓度过高,用水稀释后进行提取。干燥蛋白沉淀可4或-20长期保

存。

2. 血浆蛋白或疏水蛋白溶解较慢,反复数次95煮并加以-20冻融可助溶必要时4溶解过夜,或用2% SDS溶解沉淀,95℃,然后离心去除不

溶解物。

3. 定量蛋白应使用不含溴酚的凝胶上样缓冲液溶解沉淀,蛋白定量后再加入溴酚

4. 提取培养细胞总蛋白用蒸馏水或1% SDS制备一定体积的细胞悬液,振荡裂解细胞,然后执行上述液体样品蛋白提取程序。

5. 实体组织的蛋白提取可使用P1250实体组织和细胞蛋白抽提试剂盒

6. 提取试剂有刺激性,一旦接触立即用水清洗。

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