产品描述:
绝大多数正常细胞的分裂能力是有限的,在不能分裂后就进入衰老状态,此过程即为细胞衰老(cell senescence),细胞衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制型衰老(replicative senescence)。 正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂,出现不可逆的生长停滞,此时细胞仍然是存活的,但是细胞形 态和生理代谢活性发生明显变化,通常表现为细胞体积变大,与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶,通常在 pH4.0时表现活性,但在衰老细胞内该酶在pH6.0条件下表现活性。本试剂盒即是基于此现象及原理,针对衰老相关β-半乳糖苷酶活性水平上调而对衰老组织或细胞 进行染色。具体反应原理就是以X-Gal为底物,衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物. 表现为细胞胞质有蓝色沉积物,可以在光学显微镜下进行观察。按照每个样品染色液用量为1mL计算,本试剂盒可完成100个样品的染色。
储存条件:
冰袋(wet ice)运输;2-8℃避光保存,有效期12个月。其中X-Gal粉末如果配制成溶液后分装成小份-20℃保存,3个月内有效。
产品组成:
| β-半乳糖苷酶染色固定液 | 100 ml |
| β-半乳糖苷酶染色液 A | 100 ml |
| β-半乳糖苷酶染色液 B | 1.2 ml |
| DMF( 二甲基甲酰胺) | 5 ml |
| X-Gal( powder) | 100 mg |
注意事项:
1. X-Gal 溶液需室温完全解冻混匀后再使用;
2. β-半乳糖苷酶染色液 A 和B 需提前恢复至室温后再使用,配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用;
3. 衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的 pH 条件,不能在 CO2 培养箱中进行孵育显色,否则会 影响染色工作液的 pH,导致染色失败;
4. 配制染色工作液时请选择聚丙烯( PP)或玻璃材质的耗材,不能用聚苯乙烯(PS)材质的耗材;
5. 在显色 2 h-过夜期间需多次观察显色情况,时间过短可能导致阴性结果;时间太长则可能导致假阳性。 显色时间与样本本身所含的β-半乳糖苷酶量多少有密切关系;
6. 在配制染色工作液前,需检查染色液 A 的 pH 值,如果不是 6.0(可能因保存条件导致pH 发生改变), 需用 HCl 或 NaOH 调节 pH 至 6.0 再使用;
7. 组织切片的β-半乳糖苷酶染色,对于样本的前期准备要求较高,样本需-80℃保存,并尽快完成检测。 因为β-半乳糖苷酶非常容易失活,样本保存不当或时间过久,都可能导致酶失活,则染色时没有阳性;
8. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。
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