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葡萄糖氧化酶法测定试剂盒 (Glucose Oxidase Method, GOD) E1010
  • 品  牌:

    普利莱
  • 货  号:

    E1010
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描述:葡萄糖能够为组织细胞提供能量。生理性饥饿、剧烈运动、营养不良都会导致血糖降低糖尿病、肥胖疾病会使血糖升高采用氧化酶法进行葡萄糖含量测定,是世界卫生组织中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。本试剂盒对此法经过改良,使检测灵敏度比普通方法提高约10倍,其检测下限为5~10µmol/L,线性范围在10~20000 µmol/L适用于测定液、细胞培养基内的低浓度葡萄糖含量,也胜任各种临床和基础实验中对于葡萄糖含量的测量。

原理:根据Trinder反应原理1,2,葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2);然后过氧化物酶(POD)催化过氧化氢,使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺,颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。

参考文献:

1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145.

适用范围测定人及动物血清、血浆、脑脊液、等样品中的葡萄糖含量

组成(200次)(1)1ml 葡萄糖标准品10 mmol/L (相当180 mg/100 ml)    (2) 32 ml 试剂R1   (3) 8 ml 试剂R2

储存条件:4 ºC 保存 6有效

所需设备:721722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm,如仪器无此波长建议优先选用570530490nm

操作步骤:

一.工作溶液配制:4:1比例,取8 ml试剂R12 ml试剂R2混合得到10 ml 工作溶液。当天使用或4ºC保存1

二.标准品稀释10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释2000100050025012562.5、31.2515.625µM注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽,通常设置黑体标记的4管即可,一般不需要设置大于2~10mM的标准管,以此得到的标准曲线用来测定大于2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。注意:不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液

三、葡萄糖含量测定

1. 参见下表加样。先加标准或待测样品,后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。

2. 37ºC 反应20min (15~30min)25ºC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。

3. 先用蒸馏水+工作液空白管调零,然后测定各管OD值。

4. 绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度

附Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,浓度为x。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公--R2-

5. 如果仅用单一标准管:葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品管OD空白OD) / (标准OD空白管OD)。

加样表

(可微量调整样品与工作液体积比例)

96微板测试反应体积200μl

比色杯测试反应体积800 μl

空白管

标准管

样品

空白管

标准管

样品

蒸馏水μl

5

蒸馏水μl

20

标准品μl

5

标准品μl

20

标品 μl

5

标品 μl

20

工作溶液μl

195

195

195

工作溶液μl

780

780

780

说明

1. 人空腹血糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl),低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L,高血糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L不同单位之间的换算公式:1 mmol/L = 0.0555 mg/100 ml (dl)1 mmol/L × 18 = 1 mg/100 ml (dl)

2. 检测线性范围0.02~20 mmol/L。浓度超过20 mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1-2倍后测量。批内变异系数为0.7~2.0%,批间变异系数为~2%。准确度与精密度达到临床检测要求。

3. 不能用于直接测定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸浓度比较高,会消耗葡萄糖氧化酶反应中产生的过氧化氢,降低呈色反应,从而引起负误差使结果偏低。还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质谷胱甘肽可竞争消耗反应产生的过氧化氢,使测定结果偏低。含强还原剂如二硫苏糖醇、巯基乙醇样品不建议使用本法。本法反应终体系可容忍的干扰物质最高浓度:血红蛋白10 g/L,黄疽标本胆红素340 μmol/L,氟化钠3 g/L,尿素46.7 mmol/L (280 mg/dl),尿酸2.95 mmol/L (50 mg/dl),肌酐4.42 mmol/L (50 mg/dl),半胱氨酸50 mg/dl,甘油三酯500 mg/dl

4. 《全国临床检验操作规程》指明测定血糖草酸钾-氟化钠抗凝:每5ml血液加0.2 ml 6%草酸钾-4%氟化钠;其优点是抑制糖酵解和分解,测得的葡萄糖浓度更接近真实;缺点是干扰其它生化检查项目。枸椽酸钠抗凝剂易引起溶血,也干许多生化检查项目。如必须用同一份标本做全套生化检测,可采用肝素钠抗凝剂。

5. 血样应在30分钟内完成测定血清或血浆仍含大量血细胞,室温下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使测量值降低室温放置1小时葡萄糖含量开始降低,3小时后明显下降。4 ºC保存血样,葡萄糖稳定性明显增加。使用血浆测定葡萄糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下用血清标本测得的葡萄糖浓度偏低,且随着样品放置时间延长而明显下降。

使用普利莱葡萄糖氧化酶法测定试剂盒发表的SCI文章已超过50篇,以下仅列举数篇供参考:

1、 Li D, Song J Z, Li H, et al. Storage lipid synthesis is necessary for autophagy induced by nitrogen starvation[J]. FEBS letters, 2015, 589(2): 269-276.

2、 Zhang J D, Han L, Yan S, et al. The non-metabolizable glucose analog D-glucal inhibits aflatoxin biosynthesis and promotes kojic acid production in Aspergillus flavus[J]. BMC microbiology, 2014, 14(1): 95.

3、 Yang Y, Li W, Liu Y, et al. Alpha-lipoic acid attenuates insulin resistance and improves glucose metabolism in high fat diet-fed mice[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2014.

4、 Wang L L, Qiao J, Liu H H, et al. Ratiometric Fluorescent Probe Based on Gold Nanoclusters and Alizarin Red-Boronic Acid for Monitoring Glucose in Brain Microdialysate[J]. Analytical chemistry, 2014, 86(19): 9758-9764.

5、 Huang L, Gong L, Jiang X, et al. Photoactivation of GLUT4 translocation promotes glucose uptake via PI3-K/Akt2 signaling in 3T3-L1 adipocytes[J]. Journal of Innovative Optical Health Sciences, 2014, 7(03).

6、 Yan P, Zhang L, Feng Y, et al. SHR3824, a novel selective inhibitor of renal sodium glucose cotransporter 2, exhibits antidiabetic efficacy in rodent models[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2014, 35(5): 613-624.

7、 Yang M, Dai J, Jia Y, et al. Overexpression of juxtaposed with another zinc finger gene 1 reduces proinflammatory cytokine release via inhibition of stress‐activated protein kinases and nuclear factor‐κB[J]. FEBS Journal, 2014, 281(14): 3193-3205.

8、 Zhang X, Yang R, Jia Y, et al. Hypermethylation of Sp1 binding site suppresses hypothalamic POMC in neonates and may contribute to metabolic disorders in adults: impact of maternal dietary CLAs[J]. Diabetes, 2014, 63(5): 1475-1487.

9、 Liu Y, He R. Fasting induces a high level of 3-nitrotyrosine in the brain of rats[J]. Neuroscience letters, 2010, 472(3): 204-209.

10、 Fu H, Pang S, Xue P, et al. High Levels of Expression of Fibroblast Growth Factor 21 in Transgenic Tobacco (Nicotiana benthamiana)[J]. Applied biochemistry and biotechnology, 2011, 165(2): 465-475.

11、 Zheng W, Feng X, Qiu L, et al. Identification of the antibiotic ionomycin as an unexpected peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) ligand with a unique binding mode and effective glucose-lowering activity in a mouse model of diabetes[J]. Diabetologia, 2013, 56(2): 401-411.

12、 Ma Y, Luo T, Xu W, et al. A new recombinant pituitary adenylate cyclase-activating peptide-derived peptide efficiently promotes glucose uptake and glucose-dependent insulin secretion[J]. Acta biochimica et biophysica Sinica, 2012: gms078.

13、 Zhang Z, Xue H L, Liu Y, et al. Yi-Qi-Zeng-Min-Tang, a Chinese medicine, ameliorates insulin resistance in type 2 diabetic rats[J]. World journal of gastroenterology: WJG, 2011, 17(8): 987.

14、 Yang Q, He Y, Wang W. The protective effect of Liu-Wei-Di-Huang-Fang in salt-sensitive hypertension rats[J]. Clinical and Experimental Hypertension, 2013, 36(6): 426-432.

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