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NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer C1057
  • 品  牌:

    普利莱
  • 货  号:

    C1057-100
  • 规格:

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    +
  • 价格:200.00-680.00
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NP-40裂解液 C1057

描述:

NP-40 裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGEWestern、免疫沉淀(immunol precipitationIP)、免疫共沉淀(co-IP)ELISA 等。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。NP-40 裂解液的主要成分为 Tris(pH7.4),NaCl,1% NP-40,EDTA 以及磷酸酶抑制剂。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用普利莱P1511 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存:

4℃保存,12 个月有效

制备细胞裂解产物

1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);

2. 50100 ml PCV加入5倍体积裂解液250~500 ml,涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;

3. 12000g 4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物

1. 50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS

2. 按照每20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;

4. 12000g 4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物,可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。

注意:

1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;

3. 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。

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