产品描述:
膜再生液也称抗体剥离液、一抗二抗去除液。允许对同一张膜进行多次Western Blot检测。加强型膜再生液(碱性)与温和型相比,更适用于抗原抗体结合力较强的蛋白类型。常温操作,步骤简单,省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等步骤,提高实验效率,节省实验时间。
产品特点:
节省时间:与温和型相比,孵育时间更短,10分钟即可实现抗体洗脱
操作便捷:无需重复电泳转膜,无需特殊设备
保存方便:室温保存和操作
兼容性广:适用于PVDF膜和NC膜
产品适用:
硝酸纤维素膜或PVDF膜。使用前膜可以保存在PBS或TBS缓冲液。
产品组成:
产品名称 | 规格 | 储存和效期 |
膜再生液 (加强型 碱性) | 100ml | 常温保存,一年有效 |
500ml |
操作步骤:
1. 将NC膜或PVDF膜充分浸泡于适当体积的加强型膜再生液中,室温(25ºC±3ºC)孵育8~10分钟并不时晃动。孵育时间可参考步骤4进行优化;
2. 用镊子取出膜,用TBST(B1009)淋洗膜一次,淋洗残留的膜再生液;
3. 用TBST浸泡洗膜,室温(25ºC±3ºC)孵育5分钟;
4. 确定膜上抗体是否去除与优化再生液中孵育膜的时间:用ECL(P1050)工作液孵育再生后的膜约1分钟,然后进行显影,可确定膜上的抗体是否完全去除。如显示条带,表明抗体未完全去除,应继续将膜浸泡在再生液中孵育5~20分钟。然后再次ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间;
5. 用脱脂奶粉(P1622)封闭,进行下一轮Western Blot实验。
常见问题解决方案:
1. 膜再生或Stripping的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下,将与抗原分子结合的一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜上的洗脱,如膜的类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性等。需在操作过程中优化膜再生液孵育膜的时间;
2. 冬季室内温度较低时,建议增加孵育时间,以达到最佳再生效果;
3. 本品为加强型膜再生液,当使用后抗原损失较多或预染蛋白marker变浅甚至消失时,建议使用温和型膜再生液(P1650)进行膜再生;
4. 当PVDF膜浸泡在膜再生液中,膜是否透明不影响膜再生效果;
5. 尽量避免使用干燥保存的膜,因为干的膜上的抗体很难被Strip干净;
6. 本产品室温保存,低温存放会出现溶质析出的情况,37℃水浴加热复溶后即可使用,不影响使用效果。
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