Auto-Mag® 磁珠法DNA片段分选纯化回收试剂（进口原装） AMD-S0003

产品详情
说明书下载
引用文献

产品描述:

Auto-Mag® DNA片段分选纯化回收试剂专为从PCR或NGS工作流程中快速高通量纯化DNA片段而设计，质量稳定，回收率高。该试剂是由美国AMD Biotech公司制备的Auto-Mag® 磁珠和优化的辅助试剂组成，可以选择性地回收大于100 bp的PCR产物或核酸片段，具有一致性和可靠性。本产品能够根据使用的试剂与样品的比例精准分选DNA片段，帮助用户灵活选择左侧、右侧或双侧DNA片段大小选择。操作过程和结果和目前同类产品AMPure XP 高度一致，可完美替代。Auto-Mag® DNA片段分选纯化回收试剂兼容目前所有的DNA/RNA文库试剂盒。该产品可用于手动和全自动DNA样品纯化，以及PCR产物的纯化。纯化的DNA适用于各种下游应用，包括NGS文库制备、微阵列、自动荧光测序以及较短的扩增子或限制酶消化产物的PCR后纯化。Auto-Mag® DNA片段分选纯化回收试剂是经过无RNase酶处理的，也可用于 RNA 纯化和回收。

产品组份和性状：

为黑褐色磁颗粒悬液

操作性能好，磁珠分散均匀，具有超顺磁性，磁相应时间<20s

稳定性及批次间重复性好：粒径均一，呈单分散；保存稳定性好。

应用领域：

可用于PCR产物纯化，RNA 纯化。高通量测序( NGS)建库时特定范围DNA片段大小的筛选。

储存条件:

2-8^oC 保存。切勿冷冻。

注意事项： 该产品仅适用于科学研究，请勿用于人体实验。

常见问题及回答：

Q: 什么是 DNA 片段大小选择（分选）？

A: DNA 片段大小选择（或 DNA 大小测定）是针对特定大小范围的 DNA 片段进行有针对性的捕获和回收，是 DNA 测序样品制备的关键步骤，其中仅选择特定大小范围内的 DNA 片段，通过消除不需要的小片段（如适配器二聚体或引物二聚体）来确保高质量的测序数据，最终最大限度地提高测序效率并最大限度地减少无关材料的容量浪费；精确的大小测定可以显著提高数据质量，甚至可以使用低输入样本进行测序。

Q：Auto-Mag® X-Pure Size Select （磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂）工作原理是什么？

A：是基于固相可逆固定化（SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)）的原理，可根据核酸的类型和大小选择性地将核酸与顺磁珠结合。从而实现纯化回收特定范围大小的DNA片段。例如在采用双向DNA片段选择时，第一轮所加入的磁珠结合分子量较大的DNA，通过丢弃磁珠去除比预期范围大的这部分DNA片段；第二轮再次添加的磁珠将结合剩余产物中分子量较大的DNA，通过丢弃上清去除比预期范围小的DNA片段。从而回收预期大小范围内的DNA片段。

Q: Auto-Mag® X-Pure Size Select （磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂）DNA分选工作流程？

A: 主要分有4步：

1. 混合：将磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂与 DNA/RNA 样本混合。

2. 结合：与样本混合时，磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂的纳米磁珠会与所需的 DNA/RNA 大小片段结合。这种相互作用依赖于 DNA/RNA 分子与磁珠纳米粒子表面之间的多种因素，例如电荷-电荷相互作用、亲水/疏水相互作用、范德华力和其他分子间力

3. 清洗：磁珠对磁场作出反应（通过使用磁铁，例如磁分离架），使结合的DNA能够快速有效地与样本的其余部分分离。通过抽吸去除未结合的材料，剩下的是磁珠纳米粒子结合的DNA。

4. 洗脱：从纳米磁珠粒子中释放结合的核酸片段。选定的 DNA/RNA 样本已准备好用于下游应用。

Q：磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂的主要用途是什么？

A：主要应用于高通量测序DNA片段的纯化和分选。同样用于对PCR扩增产物，或者酶切反应样品中的DNA产物的纯化回收。可以有效去除dNTP，引物，引物二聚体，接头，接头二聚体，和盐离子等杂质。

Q：磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂可以重复使用吗？

A：不可以重复使用，乙醇洗脱步骤将影响磁珠表面活性基团性能。

Q：磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂可以纯化基因组 DNA （gDNA）吗？

A：可以用于基因组 DNA （gDNA）的纯化。回收率>90%。操作时需注意：由于gDNA分子量均大于20kb，与磁珠结合的比较稳固，建议适量增加洗脱液体积，并避免干燥时间过久。

Q: 磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂是否可以进行核酸产物纯化？

A: 磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂就是专门为DNA片段分选设计的。可以进行DNA片段产物的纯化，并可根据加入的试剂于DNA样品体积的比例变化，纯化回收不同大小范围的DNA片段。例如：1.8×比例的核酸片段分选纯化回收试剂可以纯化回收 100 bp 以上的DNA产物，清除掉小于100bp的DNA片段。1.0×比例核酸片段分选纯化回收试剂可以纯化回收 250 bp 以上的DNA产物，而清除小于250bp的DNA片段，0.8×比例的核酸片段分选纯化回收试剂可以纯化回收 350 bp 以上的DNA产物，等等。详细请参考Auto-Mag® X-Pure Size Select （磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂）操作手册。

Q：磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂回收率偏低的可能的原因是什么？

A: 1）磁珠与DNA混匀不充分，未能充分吸附。应充分混匀反应体系。

2）磁珠和样品比例不对。请按照说明书进行选择合适的比例。

3）吸附孵育时间偏。，请保证孵育时间至少5 分钟。

4）磁珠丢失。磁珠分选时，丢弃上清或用乙醇洗涤磁珠时触及到了磁珠，导致部分磁珠随吸弃液体时被丢弃。请在移液过程中防止吸到磁珠。

5）洗涤用的乙醇浓度偏低。建议洗涤用乙醇浓度不低于75%。

6）磁珠干燥过度。磁珠长时间干燥导致DNA难以正常洗脱，得率降低；建议干燥时间不宜过长。

7）洗脱液体积不足。使用合适体积的洗脱液，洗脱液应可完全覆盖管内磁珠团块。

Q：纯化后DNA在后续实验中表现欠佳的原因。

A：最常见原因是由乙醇残留引。请在最后一步乙醇洗涤结束后，磁珠可于室温干燥5-10分钟，使乙醇完全干燥。确保无残留乙醇。

Q: 使用磁珠法核酸片段分选纯化回收试剂分选出的DNA片段范围大小不对称是什么原因？

A：分选操作问题。磁珠于样品的比例应严格按照说明书，同时在移液时避免吸到磁珠，防止携带磁珠到第二次分选操作。