免疫共沉淀(Co-IP)检测以抗体和抗原之间的专一性作用为基础,是用于研究蛋白质相互作用的经典方法。Co-IP检测到两种蛋白的结合,符合体内实际情况,检测结果可信度高,常用于验证两种已知蛋白的相互作用,以及寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。
实验原理:
抗体结合于琼脂糖磁珠上的Protein A/G,当抗体免疫沉淀抗原蛋白时,能与抗原蛋白结合的目的蛋白一并被沉淀下来,形成“目标蛋白+抗原蛋白+抗体+Protein A/G”免疫复合物,经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。
普利莱拥有专业的技术服务团队,可以为客户定制个性化的实验方案,积极促进客户的实验研究和产品开发,为客户提供优质的免疫共沉淀技术服务。专业的技术人员拥有丰富的行业经验,帮助客户优化实验条件,严格监管实验过程中的各个环节,保证服务质量。
技术服务流程:
Co-IP的实验步骤:
1. 蛋白提取:从细胞或组织中提取蛋白质,可以使用细胞裂解缓冲液来破裂细胞膜,并添加蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂来保护蛋白质的完整性;
2. 抗体固定:将目标蛋白质的抗体与磁珠或琼脂糖小球等固相材料结合,形成抗体固定的材料;
3. 免疫沉淀:将细胞提取物与抗体固定的材料一起孵育,使目标蛋白质与其结合伙伴形成复合物;
4. 洗涤:将反应混合物进行多次洗涤,以去除非特异性结合的蛋白质和杂质;
5. 洗脱:通过改变pH、离子强度或添加竞争剂等方式,将复合物从抗体固定材料上洗脱下来;
6. 蛋白质分析:对洗脱的样品进行蛋白质分析,可以使用SDS-PAGE和免疫印迹等技术检测目标蛋白质及其结合蛋白的存在。
客户提供样本要求:
1. 动物组织>400mg/样品;
2. 植物组织>2g/样品;
3. 细胞样品:>2×107细胞数/样品;
4. 蛋白样品:裂解样品总蛋白量>2ml/样品。干冰运输;
5. 抗体:IP级别抗体和抗体信息,若因客户抗体原因导致实验失败,由此造成的损失由客户承担。
服务项目:
服务内容 | 价格 | 周期 | 交付 |
IP | 3600/膜 | 1-2周 | 高分辨率的清晰图片,准确、客观、可信的检测数据和分析结果:western blot鉴定结果;完整实验报告(包括详细实验步骤及免疫沉淀结果相关的图表) |
Co-IP | 4500/膜 | 1-2周 | 高分辨率的清晰图片,准确、客观、可信的检测数据和分析结果:相互作用蛋白鉴定结果,western blot鉴定结果;完整实验报告(包括详细实验步骤及免疫共沉淀结果相关的图表) |
说明 |
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可直接添加技术服务人员微信applygen2004或波点电话010-62053186进行咨询订购。