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IP/CoIP
发布时间:

免疫共沉淀(Co-IP)检测以抗体和抗原之间的专一性作用为基础,是用于研究蛋白质相互作用的经典方法。Co-IP检测到两种蛋白的结合,符合体内实际情况,检测结果可信度高,常用于验证两种已知蛋白的相互作用,以及寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

实验原理:

抗体结合于琼脂糖磁珠上的Protein A/G,当抗体免疫沉淀抗原蛋白时,能与抗原蛋白结合的目的蛋白一并被沉淀下来,形成“目标蛋白+抗原蛋白+抗体+Protein A/G”免疫复合物,经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。

IP CoIP--内图1.png

免疫共沉淀(CoIP)原理图

普利莱拥有专业的技术服务团队,可以为客户定制个性化的实验方案,积极促进客户的实验研究和产品开发,为客户提供优质的免疫共沉淀技术服务。专业的技术人员拥有丰富的行业经验,帮助客户优化实验条件,严格监管实验过程中的各个环节,保证服务质量。

技术服务流程:

iP CoIP-内图.png


Co-IP的实验步骤:

1. 蛋白提取:从细胞或组织中提取蛋白质,可以使用细胞裂解缓冲液来破裂细胞膜,并添加蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂来保护蛋白质的完整性;

2. 抗体固定:将目标蛋白质的抗体与磁珠或琼脂糖小球等固相材料结合,形成抗体固定的材料;

3. 免疫沉淀:将细胞提取物与抗体固定的材料一起孵育,使目标蛋白质与其结合伙伴形成复合物;

4. 洗涤:将反应混合物进行多次洗涤,以去除非特异性结合的蛋白质和杂质;

5. 洗脱:通过改变pH、离子强度或添加竞争剂等方式,将复合物从抗体固定材料上洗脱下来;

6. 蛋白质分析:对洗脱的样品进行蛋白质分析,可以使用SDS-PAGE和免疫印迹等技术检测目标蛋白质及其结合蛋白的存在。

客户提供样本要求:

1. 动物组织>400mg/样品;

2. 植物组织>2g/样品;

3. 细胞样品:>2×107细胞数/样品;

4. 蛋白样品:裂解样品总蛋白量>2ml/样品。干冰运输;

5. 抗体:IP级别抗体和抗体信息,若因客户抗体原因导致实验失败,由此造成的损失由客户承担。

服务项目:

服务内容
价格
周期
交付
IP
3600/膜
1-2周
高分辨率的清晰图片,准确、客观、可信的检测数据和分析结果:western blot鉴定结果;完整实验报告(包括详细实验步骤及免疫沉淀结果相关的图表)
Co-IP
4500/膜
1-2周
高分辨率的清晰图片,准确、客观、可信的检测数据和分析结果:相互作用蛋白鉴定结果,western blot鉴定结果;完整实验报告(包括详细实验步骤及免疫共沉淀结果相关的图表)
说明
  1. 客户需提供样本和IP级别一抗和WB一抗,实验所需试剂、耗材、常用内参、常用二抗等均普利莱提供;
  2. Western Blot 10孔胶最多9个样,不足9个按9个收取;
  3. 普利莱提供的免费内参包括:β-actin,GAPDH,二抗包括:羊抗鼠HRP标记,羊抗兔HRP标记,如有特别要求,需用于自行提供。
  4. 普利莱承诺提供客观、真实可重复的实验结果,保证结果的真实性和准确性,但对结果是否符合预期不做承诺。
技术服务咨询订购方式:

可直接添加技术服务人员微信applygen2004或波点电话010-62053186进行咨询订购。


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