描述:
TRIzol是一种快速从组织细胞中提取总RNA的单相试剂。在样品裂解过程中TRIzol能够抑制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后离心,RNA相将与DNA和蛋白质分离,随后用异丙醇沉淀RNA。如果需要还可以继续提取DNA和蛋白质。纯化的总RNA可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。
储存:
4oC密封避光保存两年有效。
适用:
(1) 固体组织 (100 mg /ml ): 人、动物、植物的各种新鲜或冻存组织。
(2) 培养细胞 (5~10 x 106细胞/ml): 真核细胞,细菌,酵母。
(3) 液体标本(100 µl/ml): 全血、体液、尿液,病毒样品等。
说明:
1. 每100mg组织RNA预期得率为:肝脾60-100mg, 肾50mg, 脑组织10-15mg, 胎盘20-40mg, 脂肪50mg。1 x 107个细胞通常得50-100mg。
2. 测定OD值,根据OD260计算RNA浓度。OD260/280比值可初步判断RNA质量,比值在1.6-2.0之间均属正常。起始组织量过大,或吸取了有机相或碎片,将使RNA样品中蛋白和杂质含量高,RNA沉淀乙醇洗涤不充分(步骤8),均可导致OD260/280比值降低。例如,RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低,用TE或离子强度较高的溶液溶解时较高,但均不影响RNA后续使用。切记即便是已降解的RNA,OD260/280比值也能达到看似完美的2.0左右,因此该比值并非判断RNA降解与否最佳的指标。判断RNA质量的最佳途径是进行普通RNA琼脂糖电泳检查RNA完整性。
3. 检查RNA完整性。取1 mg RNA样品进行1%普通琼脂糖凝胶电泳。溴化乙锭染色,紫外灯观察。28S RNA~5 kb亮度应该约为18S RNA~2 kb的两倍,有时可见0.1-0.3 kb 的5S RNA。
4. 调整RNA溶液的体积或重沉淀RNA。(1) 加入适量DEPC处理过的高压消毒纯水或TE缓冲液,于RNA溶液中,使溶液体积补齐到约400 ml;(2) 加入 0.1 体积的3M 醋酸钠 pH 5.2,混匀;(3) 加入2.5体积的纯乙醇,混匀;(4) 冰上孵育10 分钟;(5) 12,000g 4 oC 离心10 分钟,弃上清;(6) 执行上述RNA提取程序的步骤6-8。
5. Trizol勿直接接触皮肤和吸入。如接触皮肤,立即用大量水清洗。
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