产品描述：总胆固醇（Total Cholesterol,TC）是所有脂蛋白含有胆固醇的总和，包括游离胆固醇（Free Cholesterol，FC）和胆固醇酯（Cholesterol Ester，CE），作为脂代谢的重要检测指标之一，在众多领域如心血管疾病相关研究中应用广泛。常用的总胆固醇含量测定方法有生化分析法、试纸条法和质谱法等。其中，生化分析法因其操作快速简单，是实验室首选。与血液胆固醇测定相比，实体组织细胞内的胆固醇含量测定更为复杂，试剂盒采用WHO、中国《全国临床检验操作规程》推荐的酶学方法，在经典GPO Trinder酶学反应基础上优化升级，提供高效能试剂裂解细胞和提取胆固醇，避免了有毒的有机溶剂抽提、繁杂的氮气吹干和脂质复溶等步骤，简单易行，灵敏度高，线性范围20~5000umol/L。

产品原理：试剂盒采用WHO、中国《全国临床检验操作规程》推荐的酶学方法，结合经典GPO Trinder酶学反应^1,2，原理如下：(1) 胆固醇酯酶分解胆固醇酯为游离胆固醇。(2) 胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化，反应过程产生过氧化氢。(3) 在过氧化物酶催化下进行生色反应，在550nm有最大吸收峰，光密度值与胆固醇浓度成正比。

适用范围：测定各类动物组织、细胞、酵母、昆虫、斑马鱼和粪便样本的总胆固醇含量。

产品组成：

所需设备：酶标仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm，如无此波长建议优先选用570nm，次选530、490nm。

实操演示：

产品说明：

1. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等会干扰测定。

2. 尽量使用新鲜样本，建议样品4ºC保存时间应短于24小时，-80ºC保存也应不超过1个月。

3. 本产品仅用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗。

相关问题及解决方案：

1. 取样：细胞样本的细胞量不要少于10⁶个，否则容易导致结果不准确。组织样本取材时保证位置一致，尽量避开大血管等部位，高脂肪含量样本如肝脏、脂肪组织等样本测定请使用E1026-105。

2. 样本处理：细胞、组织样本裂解时可加入蛋白酶抑制剂混合物（P1265）不影响后续测定，需通过预实验确定裂解液加入的比例，使样本中脂质全部溶解后再测定。组织细胞裂解液也可用于Western Blot检测。

3. 标准品稀释：TC测定标准品稀释需用无水乙醇倍比稀释，建议选择低吸附枪头，因乙醇有挥发性，为保证浓度准确，EP管及时盖紧盖子。建议制备标准品体积不少于50ul，减小误差。测定样本较多时，先加入总胆固醇工作液然后加入标准品、样本，保证反应时间尽量一致。

4. 工作液孵育：尽量选择37ºC水浴或金属浴孵育（尽量避开边缘），不要用37ºC恒温培养箱，其达不到工作液中各类酶反应最适温度，标准曲线偏差较大，往往得不到完美结果。

5. 反应体系的调整：可以在200ul反应体系的基础上，对总胆固醇工作液和样本体积进行微调，需注意标准品体积一并调整。不建议减少反应体系，会降低检测精度。

6. 同时用普利莱试剂盒测定TC、TG两个指标时，可以使用TG的裂解液处理一份样本，同时测定TC 、TG，两个指标。